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【摘要】 目的 探讨P16/Ki67蛋白检测在宫颈上皮内瘤变诊断中的应用价值。方法 16949例行宫颈液基细胞学检查者作为研究对象， 全部细胞标本均行巴氏染色和P16及Ki67免疫细胞化学染色， 以宫颈活检结果为金标准， 观察P16及Ki67诊断结果。结果 16949例妇科细胞学检查者中全部细胞标本均行P16免疫化学染色， 阴性14720例， 阳性2012例， 强阳性217例， 总阳性率13.67%。在改良液基细胞系统基础上实施P16和Ki67蛋白检测， 特异性明显。P16和Ki67蛋白检测的阳性表达率越高， CIN病变级别越高。结论 在宫颈上皮内瘤变的诊断中， 在改良液基细胞系统基础上实施P16和Ki67蛋白检测， 具有重要的应用价值， 可以明确CIN病变的分级， 提高诊断正确率， 降低漏诊率， 为临床治疗提供科学的依据。
【关键词】 宫颈上皮内瘤变;宫颈癌;P16;Ki67;应用价值
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.12.007
【Abstract】 Objective To investigate the application value of P16/Ki67 protein detection in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia. Methods A total of 16949 patients with thinprep cytologic test as study subjects. All cell specimens were stained with PAP staining， P16 and Ki67 immunocytochemistry. The cervical biopsy results were taken as the gold standard， and the diagnostic results of P16 and Ki67 were observed. Results In all 16949 cases of gynecological cytology， all the cell specimens were stained with P16 immunochemistry， with 14720 negative cases， 2012 positive cases， 217 strong positive cases， and the total positive rate was 13.67%. The detection of P16 and Ki67 proteins on the basis of a modified liquid-based cell system has obvious specificity. The higher the positive rate of P16 and Ki67 protein detection， the higher the CIN lesion level. Conclusion In the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia， detection of P16 and Ki67 protein in modified liquid based cell systems shows important application value， and it can identify the classification of CIN lesions， improve the accuracy of diagnosis， reduce the rate of missed diagnosis， and provide a scientific basis for clinical treatment.
【Key words】 Cervical intraepithelial neoplasia; Cervical cancer; P16; Ki67; Application value
宫颈癌是中国女性常见肿瘤之一， 超过99%的宫颈癌都由高危型人乳头瘤病毒（HPV）引起并导致P16INK4a和Ki67表达上调。从正常宫颈发生病变继而进展到宫颈癌大约需8～12年[1， 2]。使用P16INK4a和Ki67作为辅助低度鳞状上皮内病变（LSIL）和鳞状上皮细胞高度病变（HSIL）诊断的分子生物学指标在组织学中具有高度特异性和敏感性。宫颈液基细胞学筛查目前已在临床推广应用多年， 取得了显著的经济效益， 然而以巴氏染色为基础的筛查技术漏诊误诊率较高， 从而延误假阴性患者的最佳治疗时机。所以急需发展一种技术降低假阴性率， 目前的研究显示P16INK4a和Ki67在液基细胞标本中非特异性染色太强， 影响了其应用价值[3]。本研究旨在消除其非特异性染色并降低成本， 进而显著地降低宫颈液基细胞学筛查的假阴性率， 从而低成本高效率的降低宫颈癌发病率和死亡率。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取东莞市第八人民医院2015年2月～
2017年11月共16949例行宫颈液基细胞学检查者作为研究对象， 取样本， 使用改良液基细胞系统行巴氏染色和P16及Ki67免疫细胞化学染色， 以宫颈活检结果为金标准， 观察P16及Ki67诊断结果。其中妇科活检、超高频电波刀（LEEP刀）切除、宮颈锥切及子宫全切标本共2070例， 检查结果：阴性1423例， 宫颈上皮内瘤变1级（CIN 1）或CNI 1～2级
533例， CIN 2级以上114例（包括21例浸润性鳞癌）、腺癌及其它癌9例（宫颈原位及浸润性腺癌、内膜腺癌、癌肉瘤、神经内分泌癌、透明细胞癌）。
1. 2 方法 ①细胞芯片制作。取标本中有效细胞制成2行×5列细胞芯片备用。②免疫化学染色。所用鼠单克隆抗体P16及试剂盒为安必平或迈新公司产品。
1. 3 观察指标 观察宫颈液基细胞标本中免疫细胞化学染色后阳性细胞的强度、数量。
2 结果
2. 1 P16检验结果 16949例妇科细胞学检查者中全部细胞标本均行P16免疫化学染色， 阴性14720例， 阳性2012例， 强阳性217例， 总阳性率13.67%。见表1。
2. 2 不同程度宫颈病变的P16表达 2070例行宫颈病理检查， 阴性142例（9.98%）， CIN 1～2级533例（100.00%）， CIN 2级以上114例（100.00%）。见表2。
2. 3 不同程度宫颈病变的Ki67表达 2070例行宫颈病理检查， 阴性180例， 阳性指数<10（基层阳性）;CIN 1～2 级
533例， 阳性指数（65.00±8.32）;CIN 2级以上114例， 阳性指数（91.12±4.21）。见表3。
3 讨论
P16是E2F转录因子的目标蛋白之一， 在宫颈上皮内瘤变当中， 是细胞生长周期失控的敏感的特异性指標[4]。在细胞学筛查的基础上加染P16可以解决以上细胞学检查的诸多问题， P16在组织学中对CIN病变具有高度特异性， 但在液基细胞学涂片中这种特异性却消失， 当把液基细胞标本做成细胞蜡块切片以后， 其特异性又回到组织学检查的水平[5-7]。因此如果能在细胞涂片标本中就恢复其特异性， 就可以显著降低病理医生的工作量和误诊漏诊风险， 也可以完全自动化和标准化， 降低筛查成本[8]。P16不仅有助于病理科医生对CIN进行准确分级， 并且可以帮助临床医生更全面的认识癌前病变和宫颈癌的特点， 有助于对患者选择更合理的方式， 降低宫颈癌发病率和死亡率[9]。因此， P16蛋白检测在宫颈上皮内瘤变的诊断中具有重要的应用价值。
Ki67属于一种增殖细胞的核抗原， 细胞增殖属于基本的生物过程， 被高度协调机制所控制， 一旦调控机制出现错误， 将会导致人体出现肿瘤[10]。Ki67增殖指数的高低可以表示肿瘤的分化程度， 增殖指数越高， 表示患者病情越严重， 患者的生存时间越短[11]。联合使用P16/Ki67蛋白检测对宫颈病变患者进行诊断可以显著提高诊断的正确率， 使患者及早发现， 及早治疗。
参考文献
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[11] 胡艳. P16/Ki67蛋白检测（cintec plus双染技术）在宫颈上皮内瘤变的诊断及宫颈癌筛查中应用价值探讨. 浙江大学， 2016.
[收稿日期：2017-12-13]