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[摘要] 目的 探讨痰脱落细胞涂片结合膜式超薄液基细胞学检测（thin-prep cytology test，TCT）技术、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法（sputum sediment AGAR paraffin double embedding method，APSM）在肺癌高危人群筛查诊断中的应用价值。 方法 选取2014年1月～2015年6月南海经济开发区人民医院呼吸内科、居民健康体检及工厂体检可疑肺癌患者（吸烟史、胸部影像学检查阳或阴，临床症状有咳痰咯血）189例，分别进行痰脱落细胞涂片结合TCT与APSM检查，然后再行TCT与APSM细胞学比较分析。 结果 在189例疑似肺癌患者痰液标本中，自荧光支气管镜（AFB）技术和手术切除标本病理组织学检查确诊为肺癌179例占94.71%（179/189）。痰脱落细胞涂片、TCT及痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞结果之间相比较（P均>0.05），痰脱落细胞涂片结合TCT、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞检出阳性率为97.21%显著地高于TCT结合痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法的84.92%（P<0.05）。 结论 运用子宫颈脱落细胞学诊断的TCT技术、胸腹水细胞学检查APSM检查技术联合应用于痰脱落细胞中，减少因取材的重复性、延期诊断等给患者带来的生活压力，旨在提高阳性诊断率，进而达到早期发现、诊断、治疗，减少由于迟后诊断带来的肺癌的死亡率。
[关键词] 痰细胞学；TCT；痰沉渣切片法；肺癌
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）14-156-04
Application of sputum exfoliated cells smear combined with TCT， sputum sediment AGAR paraffin double embedding method in screening and diagnosis of high risk group with lung cancer
LIN Shuduan1 GUO Zhijun2 CHEN Shiqiao1 PAN Qisen1 HUANG Qianping1 JIANG Shan1 WU Yehui1
1.Nanhai Economic Development Zone People"s Hospital， Foshan 528234， China； 2.Nanhai Second People"s Hospital， Foshan 528200， China
[Abstract] Objective To explore the application value of sputum exfoliated cells smear combined with ThinPrep cytology test （TCT） and sputum sediment AGAR paraffin double embedding （APSM） method in screening and diagnosis of high risk group with lung cancer. Methods 189 suspected patients with lung cancer （history of smoking， chest imaging examination positive or negative， clinical symptoms with expectoration and hemoptysis） who were from department of respiration medicine of Nanhai economic development zone People"s Hospital， resident"s physical examination and factory physical examination from January 2014 to June 2015 were examined with sputum exfoliated cells smear combined with TCT and APSM， and then cytology of TCT and APSM were compared and analyzed. Results In the sputum specimen of 189 suspected patients with lung cancer， 179 patients were confirmed as lung cancer by auto fluorescence bronchoscope （AFB） technology and histopathologic examination of surgical specimens， which accounted for 94.71% （179/189）. Examination results of sputum exfoliated cells smear， TCT and APSM were compared （P>0.05）. Positive rate of lung cancer cell that tested by sputum exfoliated cells smear and APSM was 97.21%， which was significantly higher than 84.92% that tested by TCT combined with APSM （P<0.05）. Conclusion Application of TCT of detachment of cervix cytodiagnosis combined with APSM of pleural and ascitic fluid cytodiagnosis in sputum exfoliated cells can alleviate patients’ life pressure from repeated drawing materials and delayed diagnosis to improve positive diagnostic rate and achieve early detection， diagnosis and treatment， so as to decrease the mortality rate of lung cancer due to delayed diagnosis.
[Key words] Sputum cytology； TCT； APSM； Lung cancer
肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及病死率增长迅速且居高不下。在我国城市中首位恶性肿瘤就是肺癌，成为对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，在村镇人口发病率则居第4位，我国每年因肺癌致死的病例数约40万例，造成了巨大的社会及患者家庭的经济负担[1-2]。肺癌死亡的人数已经超过了乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌死亡人数的总和，早期肺癌因无症状而发现困难，已成为一个严重的公共健康问题[3]。其增长速度位列所有癌症类别之首，成为对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一[4-5]。肺癌早期无特殊症状出现，80%的患者在诊断时发现已经到了晚期，虽然经过治疗，但是患者生存时间很短[6]。痰细胞学直接涂片法、胸部X线检查，诊断肺癌敏感性低，此方法简便易行，但由于痰液中含有大量黏液，涂片厚薄不均，致使痰涂片癌细胞的阳性检出率降低，假阴性率（又称漏诊率）增高，肺癌早期诊断受到很大影响[7]。寻找新的肺癌诊断方法做到早确诊、早治疗，对高危人群进行筛查，并改善肺癌患者预后显得尤为重要。TCT是一种明显优于传统涂片法的检查方法，APSM几乎能收集送检标本中的全部细胞，常可保持一定的组织结构，且无细胞重叠，观察起来比较清晰。本研究旨在探讨痰脱落细胞涂片结合TCT、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法在肺癌高危人群筛查诊断中的应用价值，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2014年1月～2015年6月南海经济开发区人民医院呼吸内科、居民健康体检及工厂体检可疑肺癌患者（吸烟史、胸部影像学检查阳或阴，临床症状有咳痰咯血）189例，其中男127例，女62例，年龄29～78岁，平均（58.7±5.7）岁；纳入标准：无严重伴发疾病，患者主动配合治疗、检查，经本院伦理委员会批准，知情并签署同意书；排除标准：患者依从性片，伴有呼吸衰竭、心力衰竭等严重伴发疾病。对每一例患者标本均同时采用痰脱落细胞涂片、膜式超薄液基细胞学检测（TCT）技术及痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法进行细胞学检查。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 指导患者早晨咳痰之前刷牙漱口、喝开水一杯，以避免食物残渣和细菌的污染。让其深呼吸后用力咳痰，痰量至少5～6口，咳出肺深部的痰液，尽量选择含血丝部分或粘液丝部分的新鲜痰，痰量应3～5mL。收集在盒内送检。送检后立即做对每一例患者标本均同时采用传统涂片、液基细胞学和痰沉渣琼脂石蜡双包埋切片法进行检查。
1.2.2 痰脱落细胞涂片法 将送检的痰液用竹签挑取灰白色或带血丝均匀涂于2张玻片，每张玻片约有痰液0.2mL，厚约1mm。置于95%乙醇固定10min。苏木素-伊红（HE）染色、封片。
1.2.3 TCT法 子宫颈脱落细胞学诊断的TCT技术，是以窥阴器暴露宫颈，擦净宫颈的分泌物，用特制的一次性无菌标本采集刷采集宫颈口及颈管的脱落上皮细胞，将刷头放入盛有细胞保存液的液基瓶内漂洗。将沉淀物倒入盛有ThinPrep保存液中，轻摇至细胞块悬浮，置于4℃冰箱保存待检。15min经制成超薄细胞涂片，95%乙醇固定15min，然后采用液基薄层细胞学制片系统处理、制片、染色、封片、阅片、分析。
1.2.4 痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法 胸腹水细胞学检查APSM检查技术，取新鲜胸腹水（夏季不超过2h，冬季不超过4h）置于2～4个50mL离心管内，每管50mL，2000r/min，离心10～15min，弃去上清液，吸出沉积物涂片4～8张，自然干燥后95%乙醇固定30min，HE染色。均在52℃恒温箱中进行，苏木素复染，梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、3Lm厚切片，HE染色。
1.3 诊断标准
均采用双盲由同一细胞诊断学高年资病理医师阅，对病理学涂片中的瘤细胞采用巴氏五级法进行分级：Ⅰ级：涂片内无异形或不正常的细胞；Ⅱ级：细胞学有异形，但无恶性证据。Ⅲ级：性质不明、可疑恶性肿瘤细胞，不容易肯定良或恶性质；Ⅳ级：细胞有恶性特征，高度可疑恶性肿瘤细胞（重度核异质或形态基本符合癌细胞标准，但由重度核异质或形态基本符合癌细胞标准，需要核实）；Ⅴ级：见有癌细胞，细胞有明显恶性特征。在以上的分级中，Ⅰ级、Ⅱ级属于阴性诊断；Ⅲ级、Ⅳ级属于可疑而不确定的诊断；V级属于阳性诊断。
1.4 统计学处理
采用SPSS16.0软件包进行分析，计数资料采用x2检验，以P<0.05为差异有统计意义。
2 结果
2.1 痰脱落细胞涂片结合TCT、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞结果的比较
在189例疑似肺癌患者痰液标本中，自荧光支气管镜（AFB）技术和手术切除标本病理组织学检查确诊为肺癌179例占94.71%（179/189）。痰脱落细胞涂片、TCT及痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞结果之间比较差异无统计学意义（P均>0.05）。见表1。
表1 痰脱落细胞涂片结合TCT、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞结果
检测方法n阳性[n（%）]可疑
TCT179149（83.24）6
APSM细胞学179140（78.21）5
痰脱落细胞涂片179132（73.74）3
x2 4.78
P >0.05
2.2 TCT+APSM细胞学与痰脱落细胞涂片检测肺癌细胞结果比较
痰脱落细胞涂片结合TCT、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞检出阳性率为97.21%显著地高于TCT结合痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法的84.92%（P<0.05）。见表2。
表2 TCT+APSM细胞学与痰脱落细胞涂片检测肺癌细胞结果比较
检测方法n阳性[n（%）]
TCT+APSM细胞学179174（97.21）
痰脱落细胞涂片179132（73.74）
x2 39.69
P <0.05
3 讨论
肺癌是一种严重威胁人类健康和生命的疾病，其发病率逐年增高，在全世界癌症引起的死亡中居首位[8]，到2025年中国每年将有超过一百万新发肺癌患者[9]。由于肺癌早期缺乏特异性症状，早期肺癌因无症状而发现困难，5年总体生存率不足15%[10]。所以，寻找一种既简单、又可靠的肺癌诊断方法具有重要意义。然而，单一的涂片方法具有局限性，阳性率低，使非患者得到不必要的治疗、增加了不必要的心理负担，给诊断带来了巨大的麻烦。为了探讨研究更快捷准确的检查方法，有专家学者采用两种及三种联合方法诊断肺癌[11]。
3.1 痰脱落细胞涂片检测肺癌细胞的形态特征
痰脱落细胞学方法则是当今诊断肺癌的有利措施。该检查方法具有经济、简便、损伤小、无痛苦、结果准确等优点[12]。传统涂片时细胞厚薄不一，红细胞、黏液及杂质多见，很容易导致细胞坏死、肿胀变性，且结构不清、厚薄不均，准确率不高，染色后的细胞片背景干扰因素较多，癌细胞多分布于黏液之中。因此，观察时间长，易产生视觉疲劳、粗心和漏诊。
3.2 TCT涂片检测肺癌细胞的形态特征
美国Cytyc公司发明的的ThinPrep膜式过滤技术，过滤膜由数万个直径8µm孔径组成，细胞图像清晰，层次分明。能有效排除红细胞、炎性细胞、黏液等干扰物。细胞保持完整，细胞分布均匀，背景干净，细胞结构清晰，核大小不等，核膜清晰，染色质细腻，核仁明显，胞浆较丰富、淡染[13]。TCT所用液基绝大部分都是进口产品，价格较贵，患者难以承受，制片过程繁琐，致使国内大部分医疗机构未能开展使用。
3.3 痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法
痰沉积物石蜡切片操作简单，显微镜下所见切片厚薄均匀，细胞形态完整，染色鲜艳，对比度强，背景清晰，可提高细胞学诊断的敏感性和特异性。痰中不仅可以看到各种原发肺癌的细胞，蜡块可反复、间断切片，能够清晰的看到各种转移性肺癌的细胞，既可提高阳性率，又便于会诊。每高倍视野的有效细胞数明显多于常规涂片法。同时，由于琼脂包埋时，胸腹水中的脱落细胞及碎小组织能包埋在同一平面上，琼脂石蜡双包埋切片对癌细胞的检出率远远高于普通涂片法，琼脂石蜡双包埋切片的各细胞及碎小组织能够很顺利地完整切出，还可以防止由于切片不完全所造成的漏诊[14]。
本研究结果表明，在189例疑似肺癌患者痰液标本中，自荧光支气管镜（AFB）技术和手术切除标本病理组织学检查确诊为肺癌179例占94.71%（179/189）。痰脱落细胞涂片、TCT及痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞结果之间相比较（P均>0.05），痰脱落细胞涂片结合TCT、痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法检测肺癌细胞检出阳性率为97.21%显著地高于TCT结合痰沉渣琼脂石蜡双包埋片法的84.92%（P<0.05）。综上所述，运用子宫颈脱落细胞学诊断的TCT技术、胸腹水细胞学检查APSM检查技术联合应用于痰脱落细胞中，减少因取材的重复性、延期诊断等给患者带来的生活压力，旨在提高阳性诊断率，进而达到早期发现、诊断、治疗，有利提高患者的生存质量，减少由于迟后诊断带来的肺癌的死亡率。
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（收稿日期：2015-04-16）