工程研究所),现配现用,氯化钠、蒸馏水。
(3)糖类测定所用试剂。浓硫酸、葡萄糖、蒽酮、三氯乙酸、氢氧化钾、无水乙醇、蒸馏水等。以上所用化学试剂均为国产分析纯。
2.1.3仪器
制冰机、冷藏柜、恒温水浴锅、多功能台式高速冷冻离心机、T6新世纪紫外可见分光光度计、酶联免疫检测仪、移液枪、5mL具塞玻璃管、容量瓶、烧杯、玻璃棒、研磨棒。
2.2试验方法
将种蚜接种到5叶1心烟苗上,任其繁殖2 d后去除母蚜。待烟蚜发育至2~3龄进行接蜂,当寄生蚜大量形成时,将寄生蚜叶片采摘置于8 ℃±0.5 ℃恒温箱中,冷藏5 d后清除未形成僵蚜的烟蚜和寄生蚜,将僵蚜叶转移至3 ℃(吴兴富\[5\]等研究发现烟蚜茧蜂蛹期的最佳冷藏温度为3~5℃)冷藏箱中,每隔10 d、20 d、30 d、40 d取出,测定不同冷藏期烟蚜茧蜂(蛹)营养物质的变化及其羽化率。以未冷藏烟蚜茧蜂(蛹)为对照,每处理3个重复。
2.2.1脂肪的测定
参照Handel\[16\]和Pennington\[17\]的方法,做了部分修改。
(1)标准曲线的制作。取7支具塞玻璃管编号1~7,分别加入2.5 mg/mL胆固醇标准溶液0、5、10、20、40、60和100 μL,每支玻璃管加100 μL氯仿甲醇溶液100 μL抽提5 min。加500 μL浓硫酸,沸水浴10 min流水冷却后加香兰素试剂1000 μL,充分混匀,黑暗显色30 min后酶标仪490 nm波长下测定吸光值,以胆固醇含量为横坐标,吸光值为纵坐标做标准曲线如图1。
图1烟蚜茧蜂脂肪含量测定标准曲线
(2)脂肪的提取。取烟蚜茧蜂(蛹)20头于0.5 mL EP管中称重(蛹重),按重量体积比1∶9加入PBS缓冲液充分研磨后于4 ℃下1000 r/min离心10 min。取中间澄清液,再以4 ℃、1000 r/min离心10 min,取上清液20 μL。
取上清液5 μL于另一只1.5 mL EP管中,加入氯仿甲醇溶液1000 μL抽提5 min后加濃硫酸500 μL,沸水浴加热10 min,流水冷却至室温。加香兰素试剂1000 μL,黑暗显色20 min。取300 μL于酶标孔中,490 nm下测其吸光值。每处理3个重复。